Penelitian bertujuan 1) untuk mengetahui pengaruh pemberian NAA dan BAP terhadap pertumbuhan akar atau tunas yang muncul eksplan tembakau 2) untuk mengetahui interaksi antara BAP dan NAA dalam pertumbuhan akar atau tunas eksplan tembakau. Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Kultur Jaringan Institut Pertanian STIPER Yogyakarta. Rancangan yang digunakan adalah rancangan acak lengkap dengan 2 faktor, faktor I adalah konsentrasi NAA yang terdiri dari 4 aras yaitu tanpa NAA, NAA 1,5 ppm, NAA 3 ppm, NAA 4,5 ppm, faktor II adalah konsentrasi BAP yang terdiri dari 4 aras yaitu tanpa BAP, BAP 1,5 ppm, BAP 3 ppm, BAP 4,5 ppm. Eksplan yang digunakan berasal dari daun tembakau. Eksplan dikulturkan pada media MS yang diperkaya dengan zat pengatur tumbuh sesuai dengan perlakuan. Kesimpulan dari penelitian ini adalah 1) ada interaksi nyata antara NAA dan BAP terhadap pertumbuhan ekaplan tembakau pada parameter jumlah planlet, tinggi planlet, panjang daun, jumlah akar, panjang akar, warna kalus dan berat kalus; 2) BAP yang lebih tinggi dibanding NAA akan memacu pertumbuhan tunas dan 3) pertumbuhan akar dari eksplan tembakau tidak memiliki pola yang khusus, artinya akar dapat tumbuh pada pemberian NAA atau BAP.