Penelitian yang bertujuan untuk mengetahui pengaruh warna cahaya dan intensitas penyinaran serta mengetahui ada tidaknya interaksi antara kombinasi keduanya terhadap pertumbuhan bibit tanaman tembakau, telah dilaksanakan pada tanggal 10 Juli 2012 sampai 15 September 2012. Penelitian dilakukan di Kebun Pendidikan dan Penelitian (KP2) Institut Pertanian STIPER Yogyakarta yang terletak di Desa Maguwoharjo, Kecamatan Depok, Kabupaten Sleman. Provinsi Daerah Istimewa Yogyakarta. Rancangan penelitian menggunakan Rancangan Petak Terbagi. Petak utama adalah warna cahaya yaitu warna cahaya putih, biru dan merah. Sedangkan anak petaknya adalah intensitas penyinaran 25%, 50% dan 100%. Apabila ada beda nyata maka dilanjutkan dengan uji jarak berganda (Duncan’s Multiple Range Test) pada jenjang nyata 5%. Hasil penelitian menunjukkan terjadi interaksi nyata pada parameter berat segar dan kering batang, berat segar dan kering daun, berat segar dan kering akar. Kombinasi perlakuan warna cahaya putih dengan intensitas penyinaran 50% memberikan hasil yang terbaik pada parameter berat segar dan kering batang, berat segar dan kering daun, kommbinasi warna cahaya biru denan intensitas penyinaran 25% memberikan hasil yang terbaik pada parameter berat segar dan kering akar. Kombinasi Perlakuan warna cahaya dan intensitas penyinaran tidak berpengaruh nyata dan tidak ada interaksi terhadap parameter tinggi tanaman, jumlah daun, luas daun serta panjang akar.