Penelitian bertujuan 1) untuk mengetahui pengaruh pemberian NAA dan BAP terhadap pertumbuhan tunas dari kalus tembakau; 2) untuk mengetahui interaksi antara BAP dan NAA dalam kultur jaringan tembakau. Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Kultur Jaringan Institut Pertanian STIPER Yogyakarta. Rancangan yang digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap dengan 2 faktor, faktor I adalah konsentrasi NAA yang terdiri dari 4 aras yaitu tanpa NAA, NAA 0,5 ppm, NAA 1,0 ppm, NAA 1,5 ppm, faktor II adalah konsentrasi BAP yang terdiri dari 4 aras yaitu tanpa BAP, BAP 0,5 ppm, BAP 1,0 ppm, BAP 1,5 ppm. Eksplan yang digunakan berasal dari kalus tembakau. Eksplan dikulturkan pada media MS yang diperkaya dengan zat pengatur tumbuh sesuai dengan perlakuan. Kesimpulan dari penelitian ini adalah 1) ada interaksi yang nyata antara aplikasi NAA dan BAP terhadap jumlah tunas, jumlah daun, tinggi tunas, berat segar tunas, berat kering tunas dan berat kering kalus; 2) komposisi NAA lebih rendaj dibandingkan BAP akan memacu pertumbuhan tunas dan dengan konsentrasi NAA 0 ppm ditambahkan BAP akan memacu pertumbuhan tunas, aplikasi terbaik adalah NAA 0 ppm + 1,0 ppm.