Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh variasi suspensi jamur Aspergillus oryzae dan lama fermentasi terhadap produksi bioetanol dari biji cempedak (Artocarpus champeden sp.) melalui metode Simultaneous Saccharification and Fermentation (SSF), serta menentukan kombinasi perlakuan yang menghasilkan kadar alkohol tertinggi. Penelitian menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) faktorial dengan dua faktor, yaitu konsentrasi suspensi Aspergillus oryzae sebesar 2,5%, 5%, dan 7,5% serta lama fermentasi 3, 6, dan 9 hari, dengan dua kali ulangan. Parameter yang dianalisis meliputi kadar gula total sebelum dan setelah fermentasi, kadar alkohol, densitas, total asam, pH, dan kadar air. Data dianalisis menggunakan Analysis of Variance (ANOVA) dan dilanjutkan dengan uji Duncan pada taraf 5% apabila terdapat perbedaan nyata. Hasil penelitian menunjukkan bahwa variasi suspensi jamur dan lama fermentasi berpengaruh terhadap kadar alkohol, densitas, total asam, kadar air, dan kadar gula total setelah fermentasi, sedangkan kadar gula total sebelum fermentasi tidak menunjukkan pengaruh nyata. Lama fermentasi juga berpengaruh sangat nyata terhadap pH, sedangkan interaksi antara variasi suspensi jamur dan lama fermentasi tidak menunjukkan pengaruh nyata terhadap kadar alkohol. Kadar alkohol meningkat seiring bertambahnya lama fermentasi, dengan kadar tertinggi sebesar 15% diperoleh pada konsentrasi suspensi Aspergillus oryzae 7,5% dan lama fermentasi 9 hari. Kadar gula total setelah fermentasi menurun dari 6,67 °Brix pada fermentasi 3 hari menjadi 4,50 °Brix pada 6 hari dan 3,50 °Brix pada 9 hari.
Kata kunci: biji cempedak, bioetanol, Aspergillus oryzae, fermentasi, SSF.