Penelitian ini telah dilaksanakan di Desa Malangrejo, Ngemplak, Sleman, Yogyakarta. Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Januari 2024 sampai Februari 2024. Penelitian ini dilakukan dengan metode percobaan faktorial dengan menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) yang terdiri dari dua faktor. Faktor pertama adalah dosis pupuk guano yang terdiri dari 4 aras yaitu: kontrol, 200 g/tanaman, 400 g/tanaman , 600 g/tanaman. Faktor kedua dosis pupuk P yang tersediri dari 4 aras yaitu:Kontrol, 3 g/polybag, 6 g/polybag, 9 g/polybag. Sehingga dibutuhkan 16 kombinasi. Perlakuan dari 3 kali ulangan, sehingga jumlah tanaman yang diperlukan untuk penelitian adalah 4 x 4 x 3 = 48 tanaman. Data analisis menggunakan sidik ragam Analysis of Variance pada jenjang nyata 5%. Apabila ada beda nyata antar perlakuan diuji lanjut dengan menggunakan DMRT (Duncan Multiple Range Test) pada jenjang nyata 5% . Hasil penelitian menunjukkan ada interaksi antara penggunaan pupuk guano dan pupuk P pada jumlah bunga. Perlakuan terbaik ada pada kombinasi P 9 g dan guano 600 g, serta 6 g P dan kontrol guano. Pemberian pupuk guano dengan dosis sampai dengan 600 g/tanaman meningkatkan pertumbuhan dan hasil tanaman mentimun Jubilee pada parameter berat buah, berat rata-rata buah, panjang buah, berat segar akar, berat kering akar dan fruitset dan tidak memberikan pengaruh pada parameter lainya. Pemberian pupuk P dengan dosis 3 g/tanaman, 6 g/tanaman, 9 g/tanaman memberikan pengaruh yang sama terhadap pertumbuhan dan hasil tanaman mentimun. Pemberian pupuk P pada dosis 3 g/tanaman dapat mempercepat pertumbuhan umur bunga.