Penggantian bahan dasar dalam pembuatan cookies dapat meningkatkan nilai gizi yang tidak terdapat pada terigu dan margarin. Tujuan penelitian ini adalah untuk menganalisis substitusi kelapa parut pada tepung terigu dan RPO (Red Palm Oil) pada margarin terhadap karakteristik sifat kimia, sifat fisik, dan organoleptik cookies. Penelitian ini menggunakan rancangan blok lengkap (RBL) dengan 2 faktor. Faktor pertama adalah substitusi kelapa parut kering pada tepung terigu yang tidak disangrai dengan 3 taraf, yaitu A1=10%, A2=42,5 %, A3=75% (%b/b). Faktor kedua substitusi RPO pada margarin dengan 3 taraf, yaitu B1=25, B2=20, B3=15 (%b/b). Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa substitusi kelapa parut dan tepung terigu berpengaruh nyata terhadap kadar air, kadar abu, serat kasar, protein, warna L (kecerahan), warna a (kemerahan), warna b (kekuningan), tekstur, serta organoleptik warna, aroma, dan rasa. Selanjutnya substitusi RPO pada margarin berpengaruh nyata terhadap kadar air, protein, antioksidan, betakaroten, warna a (kemerahan), warna b (kekuningan) serta organoleptik warna, aroma, rasa. Cookies yang terbaik pada sampel A3B3 (kelapa parut 75% dan RPO 15%) dengan kadar air 2,8%, kadar abu 1,2%, protein 5%, serat 6,72%, serta antioksidan 93,0550%. Cookies dengan βkaroten tertinggi pada sampel A1B1(kelapa parut 10% dan RPO 25%) sebesar 145,969 ppm dan antioksidan tertinggi pada sampel A3B1 (kelapa parut 75% dan RPO 25%) sebesar 93,055%.