Penelitian ini bertujuan untuk pengaruh senyawa fitokimia, aktivitas antioksidan ekstrak etanol biji asam gelugur secara kulitatif dan pengaruh konsentrasi ekstrak etanol biji asam gelugur terhadap daya hambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus serta untuk mengetahui perlakuan mana yang terbaik untuk mengetahui konsentrasi penghambat minimum ekstraketanol biji asam gelugur terhadap daya hambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. Rancangan penelitian yang digunakan adalah rancangan blok lengkap dengan 1 faktor yaitu ekstrak biji asam gelugur menggunakan pelarut etanol 96% dengan metode ekstraksi maserasi yang terdiri dari 6 taraf yaitu A1 (0,5%), A2 (1%), A3 (1,5%), A4 (2%), A5 (2,5%), A6 (3%). Masing-masing perlakuan diulang sebanyak 3 kali sehingga diperoleh 6 x 3 = 18 satuan eksperimental. Evalusi penelitian yang dilakukan yaitu uji fitokimia dan aktivitas antioksidan terhadapa ekstrak biji asam gelugur serta uji antibakteri masing-masing taraf perlakuan. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa didalam ekstrak biji asam gelugur terdapat senyawa fitokimia yang meliputi flavonoid, saponin, tanin, dan terpenoid. Aktivitas antioksidan yang terdapat pada ekstrak biji asam gelugur sebesar IC₅₀ = 15,7724 ppm. Ekstrak biji asam gelugur berpengaruh terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. Perlakuan terbaik dari taraf pelarkuan yang diberikan untuk menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus yaitu perlakuan A6 dengan konsentrasi 3%.