Penelitian dengan tujuan untuk mengetahui pengaruh asal lapisan tanah sebagai media tanam dan macam pupuk organik terhadap pertumbuhan bibit kelapa sawit pre nursery telah dilakukan di Kebun Pendidikan dan Penelitian (KP2) Instiper Yogyakarta Kalikuning, di Desa Tempelsari, Maguwoharjo, Kecamatan Depok, Kabupaten Sleman, Yogyakarta pada bulan Februari – Mei 2021. Penelitian dilakukan menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) dengan dua faktor. Faktor I adalah asal lapisan tanah regusol yang terdiri dari 3 aras kedalaman (0 – 25 cm, 25 - 50 cm, dan 50 - 75 cm). Faktor II adalah macam pupuk organik yang terdiri dari 3 macam (pupuk kandang sapi, bioslury, dan pupuk hijau). Dari kedua faktor tersebut diperoleh 9 kombinasi. Setiap kombinasi dengan 5 ulangan. Data hasil pengamatan dianalisis menggunakan sidik ragam DMRT pada taraf 5%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa tidak terdapat kombinasi yang baik antara asal lapisan tanah dan macam pupuk organik terhadap pertumbuhan bibit kelapa sawit di pre nursery. Asal lapisan tanah pada kedalaman 0-25, 25-50, dan 50-75 cm memberikan pengaruh yang sama terhadap pertumbuhan bibit kelapa sawit pre nursery. Pemberian pupuk kandang sapi memberikan pengaruh yang lebih baik dibandingkan dengan bioslurry dan pupuk hijau terhadap pertumbuhan bibit kelapa sawit di pre nursery.