Permintaan kentang terus meningkat sejalan dengan bertambahnya jumlah penduduk setiap tahun. Produksi kentang tidak dapat konsisten memenuhi permintaan tersebut karena masalah penggunaan bibit kentang yang bermutu rendah. Umbi mikro merupakan strategi untuk memperoleh bahan tanam yang berkualitas dan terhindar dari penyakit yang diperoleh melalui teknik kultur jaringan. Media merupakan faktor penting penentu keberhasilan kultur jaringan. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh modifikasi media MS dan sukrosa terhadap pertumbuhan tunas dan pembentukan umbi mikro kentang. Penelitian dilakukan di Laboratorium Kultur Jaringan Institut Pertanian STIPER Yogyakarta pada bulan Maret – Juli 2022. Penelitian ini menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) dua faktor. Faktor pertama adalah modifikasi media MS yang terdiri atas tiga aras yaitu MS 1 (NH4NO3 20 ml + KH2PO4 10 ml), MS 2 (NH4NO310 ml + KH2PO4 20 ml), dan MS 3 (NH4NO3 5 ml + KH2PO4 40 ml). Faktor kedua adalah konsentrasi sukrosa yang terdiri dari tiga aras yaitu S1 (30 g), S2 (40 g) dan S3 (50 g) serta pemberian hormon BAP sebanyak 3,4 ppm/L. Hasil penelitian berupa data kuantitatif dianalisis menggunakan Microsoft Excel, sedangkan data kualitatif disajikan dalam bentuk gambar dan dijelaskan secara deskriptif. Hasil penelitian menunjukkan bahwa terdapat interaksi antara perlakuan modifikasi media MS dan sukrosa terhadap pertumbuhan tunas dan pembentukan umbi mikro. Perlakuan komposisi media MS dengan takaran normal memberikan pengaruh terbaik terhadap pertumbuhan tunas (jumlah akar, tinggi tanaman dan jumlah ruas) serta pembentukan umbi mikro (berat umbi mikro). Perlakuan modifikasi sukrosa 40 g memberikan pengaruh terbaik pada parameter jumlah tunas, jumlah akar, jumlah ruas dan jumlah umbi mikro yang terbentuk.