Penelitian ini bertujuan untuk : (1) mengetahui pengaruh jenis dan penambahan pengasam alami terhadap karakteristik sirup pepino; (2) mengetahui komposisi jenis dan penambahan pengasam alami yang menghasilkan sirup pepino yang paling disukai oleh panelis. Penelitian ini menggunakan metode Rancangan Blok Lengkap (RBL) dengan 2 faktor. Faktor pertama yaitu jenis jeruk (A) dengan 3 taraf yaitu (A1=jeruk nipis), (A2=jeruk lemon), (A3=jeruk peras). Faktor kedua adalah penambahan pengasam alami berdasarkan basis volume sari pepino 200 ml dengan 3 taraf yaitu (B1=2,5%), (B2=5%), (B3=7,5%). Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa jenis jeruk dan penambahan pengasam alami berpengaruh terhadap seluruh sifat fisik (viskositas, total perbedaan warna), sifat kimia (total padatan terlarut, pH, vitamin C, dan antioksidan), dan organoleptik (warna, aroma, rasa) sirup pepino. Sampel A3B2 dengan jenis jeruk peras dan penambahan pengasam alami 5% merupakan sirup pepino yang paling disukai panelis dengan skor 6, kategori suka.